ChIP實驗原理：是在活細胞狀態下固定蛋白質－DNA復合物，并將其隨機切斷為一定長度范圍內的染色質小片段，然后通過免疫學方法沉淀此復合體，特異性地富集目的蛋白結合的DNA片段，通過對目的片段的純化與檢測，從而獲得蛋白質與DNA相互作用的信息。

1.細胞交聯 Crosslinking

目的：通過甲醛交聯將蛋白質與DNA結合固定，形成穩定的復合物。

步驟：向細胞培養基中加入甲醛（通常濃度為1%），孵育10-15分鐘。加入甘氨酸終止交聯反應。收集細胞，用預冷的PBS洗滌

2.細胞裂解 Cell Lysis

目的：裂解細胞，釋放染色質

步驟：使用含有蛋白酶抑制劑的裂解緩沖液裂解細胞。

離心收集細胞核。

3.染色質打斷 Chromatin Shearing

目的：將染色質打斷成200-1000 bp的片段，便于后續免疫沉淀。

步驟：（注意打斷后需通過瓊脂糖凝膠電泳或生物分析儀檢測片段大小。）

超聲打斷：使用超聲儀將染色質打斷。

酶解法：使用微球菌核酸酶（MNase）消化染色質。

4.免疫沉淀 Immunoprecipitation, IP

目的：利用特異性抗體捕獲目標蛋白-DNA復合物。

步驟：將染色質片段與目標蛋白的特異性抗體孵育（通常過夜）。加入Protein A/G磁珠或瓊脂糖珠，捕獲抗體-蛋白-DNA復合物。洗滌磁珠，去除非特異性結合。

5.解交聯 Reverse Crosslinking

目的：釋放DNA，便于后續分析。

步驟：加入含有蛋白酶K的解交聯緩沖液，65℃孵育數小時或過夜。加熱使蛋白質變性，釋放DNA。

6.DNA純化 DNA Purification

目的：純化DNA，去除蛋白質和RNA。

步驟：使用酚-氯仿抽提或商業化的DNA純化試劑盒。通過乙醇沉淀或離心柱法回收DNA。

7.DNA分析 DNA Analysis

目的：檢測目標DNA片段。

方法：qPCR：定量檢測目標DNA片段的富集程度。

測序（ChIP-seq）：高通量測序分析全基因組范圍內的蛋白質結合位點。

ChIP實驗的關鍵點：

抗體特異性：抗體的質量直接影響實驗結果，需選擇經過驗證的高特異性抗體。

染色質打斷：片段大小需控制在200-1000 bp，過大或過小都會影響免疫沉淀效率。

對照設置：包括Input對照、IgG對照等，確保實驗結果的可靠性。

ChIP實驗雖然步驟較多，但通過優化條件和選擇合適的工具（如高效的DNA打斷儀），可以顯著提高實驗效率和成功率。

傳統超聲打斷法存在諸多痛點：

操作繁瑣，耗時耗力：需要反復摸索超聲條件，耗時長達數小時。

樣本損失大，重復性差：超聲過程中容易產生熱量，導致樣本降解，實驗結果不穩定。

難以處理微量樣本：傳統方法對樣本量要求高，難以滿足微量樣本的實驗需求。

別擔心！這款凈信DNA打斷儀，專為ChIP實驗量身打造！

高效便捷，省時省力：采用獨特的非接觸超聲波DNA打斷技術，利用超聲波的能量，通過非接觸的方式對DNA樣品進行打斷，從而得到所需的DNA片段，效率提升數倍！

①溫和打斷，保護樣本完整性： 精確控制能量輸出，避免熱效應，最大程度保護DNA完整性，確保實驗結果準確可靠。

②微量樣本，輕松應對：可處理微量樣本，滿足各種實驗需求。

③這款DNA打斷儀，不僅是ChIP實驗的得力助手，還可應用于：下一代測序（NGS）文庫制備、DNA片段化分析、DNA蛋白質相互作用研究。